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试验三 兔的超数排卵、胚胎移植及早期胚胎观察 一、目的和要求 通过实验了解促卵泡素（FSH），孕马血清促性腺激素（PMSG），人绒毛膜促性腺激素(hCG)的作用。 了解卵子的正常和异常形态结构，认识受精卵和未受精卵之区别。 初步掌握冲卵、检卵技术，为掌握胚胎移植技术打下基础。 二、材料和仪器设备 1．动物： 选择健康的成年未孕母兔。 分组后，用作超排处理的供体。 另外，准备两只母兔，作胚胎移植受体。 实验母兔最好用产过仔的母兔，效果较好。 需公兔2～3只。 2．药品： FSH、PMSG、hCG、0.9％NaCl、75％酒精、碘酒、新洁而灭、冲卵液、846麻醉药。 3．器材： 玻璃注射器（20ml、10ml、1ml），兔用手术台、创巾、止血纱布、药棉、缝针、缝线、消炎粉、青霉素、链霉素、剪毛剪、止血钳、镊子、手术刀、剪、塑料细管（冲卵管）、表面皿、移卵管、连续变倍实体显微镜。 三、供体兔超排分组及操作步骤 FSH处理组： 先用碘酒棉球消毒母兔颈部皮肤，每只颈部皮下注射FSH10～15IU或0.15mg（动物所产品）。连续注射6次，每次相隔10～14h。总量为0.9mg/只。最后一次注射FSH后12h，从耳静脉注射hCG75IU（先用酒精棉球消毒耳朵边缘）。 随即放置于公兔笼中，观察是否配种。 超排处理后，母兔阴部表现出发情症状，能成功地配种。 PMSG处理组： 母兔颈部皮肤消毒同上。于颈部皮下一次注射PMSG150IU。之后48～72h时，同上述方法注射同量hCG。即同公兔交配。 对照组： 颈部皮下注射生理盐水。其它处理同上。 四、手术冲胚方法 于注射hCG并与公兔交配后24、36或48h，进行冲胚。 1．应用乙醚、乌拉糖、846麻醉药（耳静脉注射0.3ml/只）等麻醉后，再按外科手术要求打开腹腔。 2．将母兔背朝下方固定于兔手术台上。 3．在兔腹部最后两对乳头的腹中线部剪毛，用沾满肥皂液的纱布清洗局部，再用剃须刀片刮毛，先后用碘酒和酒精棉球由内向外进行消毒。然后盖上创巾并固定。 4．用手术刀在腹部正中线处皮肤切开2～3cm长的术口，再在腹壁肌白线上切一小口，用中指垫着以手术剪来扩大剪口。 5.冲卵时，注意止血，随时用温生理盐水纱布保温术部。 6.打开腹腔后，沿着子宫轻轻引出输卵管及卵巢。与卵巢下脂肪组织处，用长夹夹住以固定卵巢。仔细观察卵巢的变化。记录排卵点（卵巢排过卵后的小红点）。 7.先在卵巢附近找到输卵管伞，从伞部插入冲卵管并用手指或夹子固定，另一端接表面皿。另一人用10ml注射器配上9号针头，吸一管冲卵液（也可用生理盐水代替）。 8.从子宫向输卵管方向，于子宫角末端和输卵管交界的无血管处插入针头，使针头伸入输卵管内并用手指固定。然后慢慢的推动注射器，将冲卵液注入输卵管，使冲卵液由伞部收集到表面皿内。一般每次5ml即可。注意冲卵液不得流失。 五、胚胎观察 将接有冲卵液的表面皿置于实体显微镜下，检查胚胎的数量和发育形态。 正常兔受精卵为卵圆形，直径约140µm，在透明带外围有一厚层粘蛋白层（为兔胚胎特有结构）。卵黄颗粒很细，分布很均匀。容易看到核的变化。在卵黄周隙内可见两个极体。 未受精的卵母细胞中，粗细不一的卵黄颗粒清楚可见，且分布不均。不能看到细胞核。在卵黄周隙内只有一个极体。 一般在交配后24h，受精卵已发育成2-细胞胚胎。48h即发育成16-细胞胚胎（早期桑椹胚）。 六、胚胎移植 1．受体的选择： 选择与供体发情时间一致（相差不超过一天）的受体（自然发情或超排处理诱发发情）。 2．麻醉、保定及开腹手术： 参照供体处理方法。 3．胚胎分装： 先向移卵管内吸进少量PBS，接着吸入一点空气，然后再将胚胎连同少量PBS吸入，接着再吸入一点空气和PBS, 在移卵管尖端需保留一端空隙。这样就可防止胚胎丢失。 4．移植部位： 将胚胎移入排卵侧的生长道内。凡从供体输卵管内得到的胚胎应移植到受体输卵管内。从输卵管伞部插入2～3cm深，轻轻地注入胚胎，然后慢慢地抽出移卵管。一般一侧输卵管可移植5～10枚胚胎。如从供体子宫内收集的胚胎也应移植到受体母兔相应的部位。 5．按外科手术要求分别缝合肌层和皮肤。并进行消毒。注意术后护理。 七、作业 简述实验过程和结果，根据结果进行分析。 本文来源：https://www.dywdw.cn/0fe5404b10a6f524ccbf8567.html
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2023-05-03
