【#第一文档网# 导语】以下是®第一文档网的小编为您整理的《蓖麻毒素》，欢迎阅读！
蓖麻毒素的分离与提纯 近年来,从蓖麻中提取分离蓖麻毒素又是一个新的研究热点。首先,是因为蓖麻毒素有很好的药用价值,如用于医药、农药,特别是用于抗肿瘤的靶向药物。其次,在检测中制备标准样品是必备的。 前人在研究蓖麻毒素的分离与提纯方法时，提出了不同的分离与提纯方法。 温燕梅等在“蓖麻不同部位杀虫活性成分蓖麻碱的提取及含量”一文中提出了用微波辅助提取蓖麻不同部位的蓖麻碱。蓖麻的提取:蓖麻不同部位在鼓风干燥箱50 ℃下烘至恒重，粉碎，用乙醚回流提取2 h，去除其中的油脂和色素，自然晾干备用。 按照参考文献[5]方法，称取30 g，以料液质量比1∶20加入水，在微波炉以中高火作用15 min，趁热过滤，将滤渣重复上述步骤再提取1次。 将两次的粗提取液合并，搅拌均匀，用旋转蒸发仪浓缩，然后用鼓风干燥箱于70 ℃下烘干成膏状，用索氏提取器加入乙醇回流提取2 h并浓缩至30 mL左右，让其缓慢冷却析出结晶。 郑成在“蓖麻碱的提取、纯化、改性及其杀虫活性研究”一文中也是用微波辅助的方法进行提取蓖麻碱。 赵丹在“蓖麻毒蛋白的提纯及杀虫效果研究”一文中提出用Nicolson等的方法提纯毒蛋白。称取40.0g脱壳蓖麻籽，120ml0.lmol/LpH7.2磷酸缓冲液匀浆，4℃冰箱中抽提24小时，4000rm/min离心20min，小心去除表面脂肪层取上清液，上清液中加入固体(NH4)2SO4至30%饱和度，4oC冰箱过夜。4O00rm/min离心20min，取上清。上清液中加入固体(NH4)2SO4饱和度50%，4oC冰箱保存8h，4000rm/min离心20min，弃上清液。将沉淀用适量001mol/LpH.72磷酸缓冲液溶解，在001mol/LpH.72磷酸缓冲液中透析去盐。用PEG10000覆盖透析袋至于4℃冰箱中过夜，浓缩得粗提取液。选用2*25cm层析柱，将Sepharose4B缓慢装入层析柱中，避免产生气泡和断层，以0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液平衡12h，用核酸蛋白检测仪检测28Onm波长的吸收峰。将浓缩的粗毒液缓慢加入层析柱中，动作轻柔避免破坏胶面。使蓖麻毒素充分吸附在柱上。用0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液洗脱，核酸蛋白检测仪检测280nm波长下吸收峰，直至吸光值下降至0.1以下。用0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液透析收集液除去半乳糖，EPG10000适当浓缩后，备用。用0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液平衡并洗脱，蛋白检测仪检测28Omn吸光值，收集吸收峰。 高宝岩在“蓖麻毒蛋白的提取及分析”一文中也是此方法提纯收集毒蛋白的。 中提取蓖麻碱。 （1） 从蓖麻籽壳中提取蓖麻碱的化学提取方法 用氯仿作为溶剂进行提取将经过通风干燥过的蓖麻籽壳分别称取30克、40克、50克，用食品粉碎机粉碎，粉碎效果达到能够通过100目双层筛布程度。加入乙醚和石油醚混合液(1:2)，固液比(l:4)，放入超声波仪中超声20分钟，并不断用玻璃棒搅拌，取出后静止停放，待上层混合液澄清时将其倾出。反复上述操作3次后，通过低温干燥器进行干燥，得到松散的蓖麻籽壳。配置浓度为3%0稀盐酸水溶液，将称取的蓖麻籽壳按固液比1:20分别置于所配置的稀酸溶液中进行煎煮，煎煮时间为2h、4h、6h，煎煮次数为3次。经过2h煎煮后，将上述的稀酸溶液分别收集，用中速滤纸进行过滤，然后将滤液置于分液漏斗中，倒入石油醚进一步去除油脂、蹂质等物质，滤液与石油醚混合比例为1:2，反复操作3次，去除杂质后将滤液回收，用浓氨水将溶液调为中性后，将滤液通过浓缩得到粘稠的膏状物后称取质量。然后进行第二次煎煮，煎煮时间仍为2h，收集稀酸溶液，用中速滤纸进行过滤，去除杂质，滤液浓缩后称取质量，再进行第三次煎煮，操作方法同上。煎煮时间4h、6h的方法同上。 经过上述方法即可得到蓖麻碱的粗提物，称取从蓖麻籽壳中提取的蓖麻碱粗中提取的蓖麻碱粗提物5g，经硅胶展拌后包于滤纸包内，分别放入500ml装有20Oml甲醇的索式提取器内进行回流提取，回流时间设为2h、4h、6h、8h、12h，回流提取后将溶液收集，通过旋转蒸发仪回收大部分甲醇，附着在旋转瓶内的褐色物质为蓖麻碱生物总碱，将其转移至容量瓶中，再次通过乙醇在超声波仪中进行脱色洗涤，蒸去乙醇，既得无色针状结晶蓖麻碱生物总碱。称取其质量，进行比较。 在蓖麻籽壳中，其结果是蓖麻总碱的提取乙醇为提取溶剂效果最佳，其次是甲醇，再次是氯仿。蓖麻子叶中也是用上述三种方法提取蓖麻碱，其结果是从蓖麻子叶粗提物中提取蓖麻总碱以乙醇为提取溶剂效果最佳，其次是甲醇，再次是氯仿。 本文来源：https://www.dywdw.cn/1e6a76506d85ec3a87c24028915f804d2b1687e8.html
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2022-03-29
