【#第一文档网# 导语】以下是®第一文档网的小编为您整理的《核酸检测——荧光染料法如何操作？》，欢迎阅读！
核酸检测——荧光染料法如何操作？ DNA编码所有的遗传信息，是创造所有生物生命的蓝图。它充当允许遗传物质在世代之间传递的存储设备。而RNA充当读取DNA中存储信息的读卡器。DNA中存储的遗传信息由RNA携带，同时RNA充当核糖体的信使，并在核糖体中合成蛋白质。分子生物学这整个过程称为“中心法则”。 基于核酸的检测的范围继续扩大，关于选择核酸检测方法有很多。 目前常用的是分光光度法，分光光度法利用了核酸的紫外吸收特性。核酸，包括DNA和RNA，均由脱氧核糖或核糖、磷酸基及含氮碱基构成。其中，由于碱基含有芳香环结构，因此具有紫外吸收的特性。通过测定260nm处的吸光度，对DNA和RNA进行定量。与此同时，还能通过计算OD260/OD280估计核酸的纯度。由于此法不具有选择性，无法区分DNA、RNA或蛋白质。检测数值极易受到其他污染物(如游离核苷酸、盐和有机化合物)和碱基组成差异的影响。 今天给大家介绍荧光染料法，多款荧光染料特异地与双链DNA、单链DNA、RNA相结合，并在特定波长光源的激发下，发出荧光，这一系统不会检测到样本中可能存在的其他杂质分子，荧光强度与样品中的靶分子浓度相对应。 DNA和RNA定量试剂 Helixyte Green dsDNA定量试剂（17597）和StrandBrite Green RNA定量试剂（17611）分别对双链DNA和单链RNA进行了优化。它们对核酸有很高的亲和力，对结合核酸有极大的荧光增强作用，使得在几分钟内直接检测复杂溶液中微量核酸成为可能，而且一般不会受到其他生物分子的干扰。 图1.小牛胸腺DNA中使用Helixyte 绿色和PicoGreen进行DNA定量。由图看出Helixyte 绿色和PicoGreen 具有几乎相同的性能。 Helixyte Green是一种出色的核酸定量试剂，与dsDNA结合后可显著增强荧光。它具有与PicoGreen®相同的光谱特性，因此是PicoGreen®的绝佳替代品（PicoGreen®是Invitrogen的商标）。它是可用于定量溶液中DNA的最敏感的染色剂之一。使用Helixyte Green，您可以在ssDNA，RNA和游离核苷酸存在的情况下选择性地检测低至25 pg / ml的dsDNA。该测定法在三个数量级上是线性的，并且几乎没有序列依赖性，使您能够准确地测量来自多种来源的DNA，包括基因组DNA，病毒DNA，微量制备DNA或PCR扩增产物。 在进行Northern杂交分析、S1核酸酶分析、RNase保护分析、cDNA文库制备、反转录PCR之前，检测和定量少量RNA对于多种分子生物学过程非常重要，例如测量体外转录RNA的产量和测量RNA浓度。测量核酸浓度最常用的技术是在260nm处测定吸光度，吸光度法的主要缺点是蛋白质、游离核苷酸和其他紫外线吸收化合物的干扰，但使用敏感的荧光核酸试剂可以缓解这种干扰问题。StrandBrite RNA定量试剂是一种用于溶液中RNA定量的超灵敏荧光核酸染料。StrandBrite RNA定量试剂可以用荧光酶标仪或荧光分析仪检测到低至5ng/mL的RNA。 Helixyte Green dsDNA和StrandBrite Green RNA探针的优势： 高灵敏度：Helixyte Green和StrandBrite Green的灵敏度比UV吸收率测定法高10,000倍 选择性高：与紫外吸收的测量不同，这些检测不受蛋白质，游离核苷酸或非常短的寡核苷酸的影响，从而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在复杂混合物（例如血清或全血）中更加准确。 操作简单：这些检测方法非常简单，不需要分离步骤，因此非常适合自动化，高通量筛选 检范围广：对于Helixyte Green的检测，定量在四个数量级内都是准确的。基于StrandBrite 的荧光检测在三个数量级上都是准确的。 本文来源：https://www.dywdw.cn/7a08b8deaa956bec0975f46527d3240c8547a1df.html
下载此文档
搜索文档
阅读：
文档下载
2023-03-24
