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胡萝卜的组织培养 胡萝卜的组织培养 （一） 组织培养 1． 准备 （1） 器具准备： ① 高压蒸汽灭菌锅： 培养基，接种工具，蒸馏水的消毒。 手持喷雾器： 装70%的酒精，用于外植体，接种工具，操作人员的消毒。 ② 超净工作台： 用于无菌操作。 ③ 设备：培养架，温度控制器，摇床，光照培养箱，烘干器，蒸馏水器，冰箱，电炉，天平，温度计，酸度计，显微镜，分注器，移液器，磁力搅拌器， ④ 常用玻璃器具：量筒，培养皿，烧杯，50ml锥形瓶，容量瓶，广口瓶，滴管，移液管，试管，酒精灯，玻璃棒， ⑤ 常用金属仪器：镊子，剪刀，解剖刀，解剖针，接种针，刀架 ⑥ 其他用品：滤纸，标签，消毒酒精棉球，封口用品 （2） 试剂：MS基本培养基 2,4-D：生长素类似物 NAA：生长素类似物 6-BA：细胞分裂素类似物 酒精（体积分数70%）：消毒 次氯酸钠（体积分数20%）：消毒 无菌水 1 / 3 胡萝卜的组织培养 2 .配制 类别 化合物 称取量/mg 33000 38000 8800 7400 3400 166 1240 4460 1720 50 5 5 5560 7460 20000 100 100 20 400 扩大倍数 20 20 20 20 20 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 体积/mL 1L培养 基的吸收量/mL 1000 50 大量元素储备液 NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O NaMoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O FeSO4·7H2O Na2·EDTA 肌醇 烟酸 维生素B6 维生素B1 甘氨酸 微量元素储备液 1000 5 铁盐储备液 有机物储备液 1000 1000 5 5 A. MS基本培养基配方：上述4种储备液+30g蔗糖+8g琼脂+蒸馏水定容至1000mL （pH5.6~5.8） B. 分别向MS基本培养基中加入植物激素：（pH5.6~5.8） 诱导愈伤组织形成培养基：MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D 诱导分化芽的培养基：MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA 诱导生根的培养基：MS+0.1 mg/L NAA 3.灭菌：灭菌后冷却置于常温下观察3天，检查灭菌是否彻底。 4.取材接种： a．将萝卜洗净削皮切段，擦手消毒。 b．在超净工作台上将萝卜用酒精消毒30秒，用无菌水清洗两到三次，用次氯酸钠溶液处理30min，用无菌水清洗两到三次。 c．用无菌滤纸吸取水分，在培养皿上用无菌刀将萝卜切成1cm厚的横切片，选取有形成层2 / 3 本文来源：https://www.dywdw.cn/fdbcd4180342a8956bec0975f46527d3250ca622.html
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2022-12-03
